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【企业文化】

通常用靶标-核酸复合物的平衡解离常数Kd表征。Kd值越小，表明亲和力越强。当使用梯度浓度的核酸与靶标共同孵育后，检测核酸适配体-靶标复合物的浓度，按公式Y=Bmax X/(Kd + X)即可求算出Kd值。其中确定Y值的方法包括荧光成像法、荧光光谱法、流式细胞仪法、表面等离子共振法、DNA捕获元件法和ELISA法。细菌靶标与核酸适配体结合的亲和力和特异性是评价所筛选的适配体的重要参数。通常用靶标-核酸复合物的平衡解离常数Kd表征相互作用。Kd值越小，表明两者相互作用越强。当使用梯度浓度的核酸与靶标共同孵育后，检测核酸适配体-靶标复合物的浓度，按下述公式即可求算出Kd值。Y=Bmax X/(Kd + X)上述公式中：Y：核酸适配体-靶标复合物浓度；X：核酸浓度；Bmax：常数。Kd测定时可使用荧光标记的核酸。通过测定复合物的荧光强度求算Y值，Y值的确定有多种方法：1、荧光成像法将荧光标记的核酸与靶标的孵育混合物经离心去除未结合的适配体后，置于荧光显微镜下观测，直接对带有荧光的成像菌体计数，可求出Y值。2、荧光光谱法将核酸与靶标的孵育混合物通过离心等方法分离后，使用荧光光谱仪测定核酸-靶标复合物的荧光强度，可作为Y值。3、流式细胞仪法将孵育混合物通过流式细胞仪，测定带有荧光标记的核酸-靶标复合物的数量。流式细胞仪可以对复合物进行定量，同时将核酸-靶标复合物与游离的核酸或靶标分离。

これは、通常、標的 - 核酸複合体の平衡解離定数Kdを特徴とする。 Kd値が小さいほど、親和性は強い。標的核酸の濃度勾配は、核酸アプタマーを検出中でインキュベートされたとき - 式Y = BmaxのX /（Kdを+ X）によれば、標的複合体の濃度をKd値を見つけるために計算されました。 Y値の測定方法としては、蛍光イメージング法、蛍光分光法、フローサイトメトリー法、表面プラズモン共鳴法、DNA捕捉要素法、ELISA法等が挙げられる。細菌標的の核酸アプタマーへの結合の親和性および特異性は、スクリーニングされたアプタマーを評価するための重要なパラメーターである。相互作用は、典型的には、標的 - 核酸複合体の平衡解離定数Kdによって特徴付けられる。 Kd値が小さいほど、2つの間の相互作用が強くなる。核酸の勾配濃度を標的とインキュベートすると、核酸アプタマー - 標的複合体の濃度が検出され、以下の式によりKd値を算出することができる。 Y = Bmax×/（Kd + X）上記式中、Yは核酸アプタマー - 標的複合体濃度、Xは核酸濃度、Bmaxは定数である。蛍光標識された核酸は、Kdアッセイで使用することができる。 Y値計算複雑な要件の蛍光強度を測定することにより、Yの値が決定されるいくつかの方法がある：1、蛍光イメージング法、蛍光標識された標的核酸との混合物は、未結合アプタマー配置された蛍光を除去するために遠心分離しインキュベートY値は、顕微鏡下で蛍光を用いて撮像した細胞を直接観察することによって得ることができる。蛍光強度標的複合体Yの値として使用することができる - 図2に示すように、混合物をインキュベートし、標的核酸と蛍光分光法は、遠心分離または蛍光分光計を用いて、核酸アッセイは、等により分離しました。フローサイトメトリーインキュベーション混合物をフローサイトメーターに通し、蛍光標識した核酸 - 標的複合体の量を決定した。フローサイトメーターは、核酸 - 標的複合体を遊離核酸または標的から分離しながら複合体を定量することができる。

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