- 产品描述
西尼罗河间接免疫荧光法检测试剂盒
广州健仑生物科技有限公司
检查
1.实验室检查
白细胞数减少,脑炎型者脑脊液中淋巴细胞增多,蛋白增高。
2.免疫学检查
利用血清学抗体检测方法,常用ELISA(酶联免疫吸附实验)法,采用患者急性期和恢复期双份血清,两份血清同时进行检测,以恢复期血清较急性期特异性IgG抗体滴度升高4倍以上为阳性,有助于本病的诊断。
3.病原学检查
自潜伏末期至发病后第5天,从患者血液或脑脊液中分离出病毒,阳性率较高,对新分离病毒的鉴定一般采用已知血清进行中和实验。
4.分子生物学检查
RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)法检测,通过设计西尼罗河热病毒特异引物对血清或脑脊液标本进行RT-PCR试验,阳性率高,具有特异性诊断价值。
用途
西尼罗(WN)病毒IgG ELISA,利用了西尼罗重组抗原检测人体血清或血浆中的西尼罗抗体。本实验仅用于辅助诊断人感染了西尼罗病毒,不用于筛查血液或血液成分。仅供专业人员体外诊断使用。
概述
感染了西尼罗病毒会导致包括脑炎等一系列症状的疾病,西尼罗病毒在世界广泛传播,已在50多个国家检测出该病毒。本试验经CDC提供的试剂检验与验证。本试验使用了一种称为WNRA的重组抗原,它可以作为西尼罗病毒感染的快速血清学指标,WNRA蛋白是一种重组抗原,它是由含有西尼罗病毒两个抗原的序列多肽构成。
实验的原理
检测西尼罗病毒IgG ELISA 是基于两步夹心法原理制造的。
提供的材料
- 微孔板(96孔 12x8):即用 每孔均包被结合西尼罗重组抗原的单抗。2-8℃下保存至保质期。
注意:WNRA和NCA已包被于微孔板。
- IgG样品稀释液:1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
- IgG阴性质控:1支 30ul 2-8℃下保存至使用。要长时间储存,将其分装于小瓶里,在-70℃下储存。
- IgG阳性质控:1支 30ul 2-8℃下保存至使用。要长时间储存,将其分装于小瓶里,在-70℃下储存。
- 洗涤液(10X):1瓶 120ml 2-8℃下保存至使用。
- EnWash:1瓶 20ml 2-8℃下保存至使用。
- 酶联物:一瓶6ml 即用 2-8℃下保存至使用。
- TMB底物液: 1支 9ml 即用 2-8℃下保存至使用。
- 终止液;1支6ml 即用 2-8℃下保存至使用。
试剂应避免反复冻融。
西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒
西尼罗河病毒荧光玻片法检测试剂盒
西尼罗河间接免疫荧光法检测试剂盒
操作步骤:
- 标记将要使用的板条,注意微孔板已经按照统一排列,如下所述包被西尼罗抗原和质控抗原。
西尼罗抗原 |
| |
板条#1 | 板条#2 | |
A | WNRA | WNRA |
B | WNRA | WNRA |
C | WNRA | WNRA |
D | WNRA | WNRA |
E | NCA | NCA |
F | NCA | NCA |
G | NCA | NCA |
H | NCA | NCA |
- 将血清样品﹑阴性质控和阳性质控同样地用样每孔加入50ul稀释后的样品,以下为一个血清样品使用一个板条的*。
- 品稀释液按1:300稀释。
| 板条1 | 板条2 | |
血清样品 | |||
A | IgG N | 样品1 | |
B | IgG N | 样品1 | |
C | IgG P | 样品2 | |
D | IgG P | 样品2 | |
E | IgG P | 样品2 | |
F | IgG P | 样品2 | |
G | IgG N | 样品1 | |
H | IgG N | 样品1 |
- 封板,在湿润的温育器里37℃下温育1小时。
- 温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。
- 在每孔中加入50ul的酶联物。
- 封板,在湿润的温育器里37℃下温育1小时。
- 温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。
- 每孔加入150ul的EnWash,在室温下温育5分钟
- 温育后,用自动洗板机,使用洗涤液洗板6次。
- 每孔加入75ul的TMB底物液。
- 封板,在室温下,避光处温育10分钟。
- 每孔加入50ul的终止液终止反应。
- 在450nm处读取吸光率。
结果的计算
结果的变化将会非常大,以下结果仅供指引。
计算ISR值:
计算在同一实验里WNR抗原的两个阴性质控的平均值,计算同一实验里NC抗原的两个阴性质控的平均值,用WNRA/NCA,得出阴性质控的ISR值。同样地计算阳性质控和样品得ISR值,阳性质控的ISR值应高于3.0,阴性质控的ISR值应低于1.5。
结果的判断:
ISR | 结果 | 解释 |
≤2.0 | 阴性 | 没有检测到IgG抗体 |
2.0-3.0 | 可疑 | 需确证实验 |
≥3.0 | 阳性 | 存在IgG抗体,建议做确定性实验 |
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M蛋白刺激机体产生的相应抗 体无保护作用。抗原变异编辑肺炎链球菌可能发生的变异 有荚膜变异:即从有荚膜有毒力的光滑(S)型菌变异为失 去荚膜毒力减低或消失的粗糙(R)型。细菌抵抗力编辑抵 抗力较弱,56℃15~30分钟即被杀死。对一般消毒剂敏感 。有荚膜株抗干燥力较强。对青霉素、红霉素、林可霉素 等敏感。致病性编辑致病物质1.荚膜(capsule) 是肺炎 链球菌主要的致病因素。无荚膜的变异株无毒力,感染实 验动物,如鼠、兔等,很快被吞噬细胞吞噬并杀灭。有荚 膜的肺炎球菌可抵抗吞噬细胞的吞噬,有利于细菌在宿主 体内定居并繁殖。2.肺炎链球菌溶血素(pneumolysin) 高浓度时对实验动物有致死性。对人的致病机理尚待确定 。3.紫癜形成因子(purpura-producing principle) 注 入家兔皮内,可产生紫癜及出血点并伴有内脏出血。紫癜 形成因子与人类肺炎球菌感染间的关系尚不明确。所致疾 病肺炎链球主要引起人类大叶性肺炎。75%的成年人肺炎链 球菌肺炎及50%以上严重的肺炎链球菌菌血症是由1~8型肺 炎链球菌引起。