诺瓦克检测试纸（胶体金法）

 诺瓦克检测试纸（胶体金法）

广州健仑生物科技有限公司

诺如病毒，又称诺瓦克病毒是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的一种病毒。是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。

诺如病毒感染性腹泻在*范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。美国每年在所有的非细菌性腹泻暴发中，60-90%是由诺如病毒引起。荷兰、英国、日本、澳大利亚等发达国家也都有类似结果。在中国5岁以下腹泻儿童中，诺如病毒检出率为15%左右，血清抗体水平调查表明中国人群中诺如病毒的感染亦十分普遍。

“诺如病毒”感染性腹泻属于自限性疾病，没有疫苗和*药物，公众搞好个人卫生、食品卫生和饮水卫生是预防本病的关键，要养成勤洗手、不喝生水、生熟食物分开，避免交叉污染等健康生活习惯。

潜伏期多在24～48h，zui短12h，zui长72h。感染者发病突然，主要症状为恶心、呕吐、发热、腹痛和腹泻。儿童患者呕吐普遍，成人患者腹泻为多，24h内腹泻4～8次，粪便为稀水便或水样便，无粘液脓血。大便常规镜检WBC<15，未见RBC。原发感染患者的呕吐症状明显多于续发感染者，有些感染者仅表现出呕吐症状。此外，也可见头痛、寒颤和肌肉痛等症状，严重者可出现脱水症状。

【包装规格】

20 测试/盒

【预期用途】

诺瓦克检测试纸（胶体金法） 用于体外诊断。诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）是用

免疫层析的方法快速定性

测定人粪便样本中，基因1型（GGI）和基因2型（GGII）的诺如病毒。该试剂可以协助诊断胃肠

炎，分析有疑似诺如病毒胃肠炎症状的儿童和成人的粪便样本。

【检验原理】

 为快速、多步法侧流免疫层析检测，应用了抗诺如病毒抗原的单克隆抗体。在加样孔旁的反应窗内，有两条包被了固定抗体的平行线。检测线（T）包含了抗诺如病毒抗原的抗体。质控线C包含了抗鼠IgG的抗体。酶标记物1包含了生物素化的抗诺如病毒抗原的抗体，酶标记物2是由结合了辣根过氧化物酶的链霉菌抗生物素蛋白组成。检测过程中，先从已经准备好的粪便样本悬浊液中，吸取一定量的上清液，与一定量的酶标记物1混合，加入检测卡较小的窗口中（加样孔）。经过室温下10 分钟的孵育后，样本和酶标记物混合液被检测膜吸收，并在过滤片上移动。在这个过程中，诺如病毒阳性标本中的抗原-酶标记物复合物，与检测线上固定的抗诺如病毒抗体结合，没有结合抗原的生物素化的抗体则结合在质控线上。之后加入酶标记物2，在室温下孵育1 分钟，结合了过氧化物酶的链霉菌抗生物素，与通过特异性抗体而固定在膜上的生物素结合。

在反应窗加入洗液，洗掉没有结合的过氧化物酶。如果测试为诺如病毒阳性，加入底物后三

分钟，在检测线（T）上就会出现蓝线，同时质控线（C）上也会出现蓝线。如果质控线没有变蓝，说明这次检测的操作存在问题，结果不可以用于诊断。

【主要组成成分】

试剂盒内的试剂足够进行20次检测

测试卡 Cassette 20次检测 内装20个独立包装的测试卡

稀释缓冲液 Diluent 30 ml 样本稀释缓冲液，氯化钠蛋白缓冲液，含0.1% Kathon CG;

开瓶即用，蓝色洗液 Wash 10ml 洗液，磷酸化的氯化钠，含0.1% Thimerosal，开瓶即用

酶标记物1 Conjugate│1 7ml 稳定蛋白溶液中的生物素标记的抗诺如病毒抗体，开瓶即用，

酶标记物2 Conjugate│2 5ml 稳定蛋白溶液中的链霉菌过氧化物酶，开瓶即用

底物 Substrate 7ml 过氧化氢/TMB，开瓶即用吸液管 Pipet 25支 每包中装有25支有刻度标记的一次性塑料吸样管

【储存条件及有效期】

4-30°C保存，必须在有效期前使用。过有效期之后，产品的质量保证不再有效。同样，如果检测卡的外壳破损将会使检测卡潮湿，我们将不能保证检测卡适合使用。

有效期：6个月

【样本要求】

粪便样本必须使用没有任何添加剂的干净容器收集，试验前储存于温度应为2-8 °C。在病人症状出现后（腹泻和呕吐），应尽快进行样本采集，因为症状出现后1-3 天，病毒的清除达到zui大化。如果标本保存时间超过3 天，必须储存于-20 °C。在实验开始前，冷冻的样本必须充分解冻，回复至室温。与新鲜样本一样，复温的样本也必须在检测前，和试剂充混合。应避免样本多次冻融。

采用直肠拭子采集样本时，必须得到足够的粪便样本（大约100 mg）以确保检测进行。

【检测方法】

1.常规信息

检测前，样本、稀释缓冲液、试剂和检测卡必须恢复至室温（20 - 25 °C）。检测卡必须在即将使用前才可以从外包装中取出，检测卡一旦从外包装中取出或被使用，则不可以再次使用。检测不可以在阳光直射下进行。

2.准备样本悬浊液

取1 ml样本稀释缓冲液Diluent 加入贴好标签的试管内。对于液态粪便样本，可用盒内的一次性吸液管Pipet 吸取100 μl样本（至吸液管的第二个增粗处），悬空滴加于事先已加入提取缓冲液的标记试管中；对于固态粪便样本，取50-100mg样本（豌豆大小）加入缓冲液中。样本必须被混匀，可利用试管反复吸放，或者用漩涡混匀器将粪便悬浮液混匀。至少沉淀2分钟后，取200- 500 μl上清液置于另一干净试管中（或者未包被的微孔中）。

3.将检测卡Cassette从外包装中取出，将其放置在水平的垫子上。

4.用已经处理过同一样本的一次性吸管，从粪便悬浊液中吸取250 μl上清液（*个标记处），

加入干净的、标记的试管中。

5.在试管中加入6 滴酶标记物1 Conjugate│1（滴加时保持小瓶垂直）。

6.通过吸放的方式将混合液*混匀后，用一次性吸管将其全部吸出，以缓慢平稳连贯的水流，注入检测卡的加样孔中。将吸管倾斜约 45°}，管口指向反应窗，这样混合物就可以全部流至反应窗内。__

7.将检测卡在室温下（20 - 25 °C）孵育10 分钟。确保反应窗的检测膜已被样本混合液充分浸湿，否则请将100 μl 稀释缓冲液滴入加样孔中。

8.在反应窗中加入4 滴酶标记物2 Conjugate│2（滴加时保持小瓶垂直），再于室温下孵育至少1分钟。

9.在反应窗中，加入10滴洗液 Wash，待洗液被*吸收后，再进行后续操作。

10.在反应窗中加入6 滴底物 Substrate（滴加时保持小瓶垂直）。

11.之后的3分钟内，读出检测结果。在3分钟后出现的有色条带，没有诊断意义

【参考值（参考范围）及检验结果的解释】

1. 在加入底物后3 分钟之内，在良好采光直视下读出的检测结果，是zui可靠的。

2. 查看在反应窗的“C”标记处，是否有出现蓝色的条带（所谓的内部质控线），在反应窗的“T”标记处是否出现蓝色的条带（所谓的检测线）。颜色的强度可能会由浅变深。

3. 阳性结果：加入底物之后3 分钟内，如果同时出现两条蓝色的条带（检测线“T”和质控线“C”），可判别为阳性结果。颜色可由浅变深。如果条带只有部分清晰出现，也可以解释为阳性。膜的其他颜色改变或其他部位的阴影，都不能解释为阳性结果。

4. 阴性结果：加入底物的3 分钟后，就可以开始判别是否为阴性结果或无效结果了。如果只在反应窗的质控带“C”处出现蓝色的条带，在检测带“T”处没有蓝色条带出现，则可判定为阴性结果。阴性结果说明，在样本中没有诺如病毒的抗原存在，或抗原的量低于检测限。

5. 无效结果：在反应窗的检测带“T”和质控带“C”处，均无蓝色条带出现，或者只在检测带

“T”出现条带，这两种情况均说明检测无效，需要用新的检测卡重新进行检测。

诺如病毒抗原快速检测卡（免疫层析法）检测结果的解释：

【检验方法的局限性】

诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）用于检测基因1 型和基因2 型的诺如病毒，如

果病毒量没有低于试剂的检测限，则可以检测该种病毒是否在粪便样本中出现。粪便样本是否取样于胃肠炎病人的症状表现期，对结果的影响是非常重要的。检测中出现蓝色条带的颜色强度，不能反应临床症状的严重程度，只能提示粪便样本中的病毒抗原量。条带的蓝色可以从很浅的颜色变为很深的颜色。

阳性结果不能排除存在其他病原体感染。在样本中可能同时存在两种及以上的病原体，需要

进行鉴别的检测以确诊。双重或多重感染的症状会比一种感染引起的症状严重。

阴性结果不能排除诺如病毒的存在或诺如病毒是引发胃肠炎的原因。此种情况可因以下原

因发生：间歇性病毒排出、或者粪便样本中病毒含量过低，样本采集时间不当，运输或储存条件

不适合。如果病人高度怀疑病原体感染，应再重新留便复查。

【产品性能指标】

在验证实验中，用诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）检测113 例粪便样本。样本

从胃肠炎患者的粪便中采集，既有散发病例，也有爆发病例。样本收集于2007-2008 年的冬季，在德国汉堡的城市地区采集。在当地的卫生研究所，用RT-PCR 的方法检测新鲜的样本后，将样本冻存。2008 年7 月，将冰冻的样本融化后，在与之前相同的实验室，用诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）和已上市的诺如病毒抗原检测试剂盒（酶联免疫法），同时进行检测。

【注意事项】

1. 仅用于体外诊断。

2. 实验必须由经过专业培训的人员操作。必须严格按照医学实验室的规章制度操作。

3. 产品操作时必须严格按照说明书操作。

4. 样品稀释缓冲液中含有Kathon CG 作为防腐剂，此物质不能接触皮肤或粘膜。

5. 样本和试剂不可以用嘴吸取。

6. 样本和试剂避免接触受伤的皮肤或者粘膜。

7. 处理样本时应该戴一次性手套，完成试验后要洗手。

8. 禁止在样本和试剂实验区域内吸烟、吃东西或喝水。

9. 所有试剂和材料如果接触有潜在感染性的样本，应与样本一样，立即用适当的消毒剂（如：

次氯酸钠）或者高压高温121℃至少1 小时处理。

10. 诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）必须在效期内使用。所有的试剂都被调整

为zui适宜的活性状态。稀释或改变这些试剂将减少其活性。如果不按照说明中的时

间和温度进行操作，将会导致错误的结果。

11. 不同批号的诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）试剂盒中的试剂不可以混用。

12. 试剂和样本必须避免微生物的污染，否则将会影响检测结果。

13. 吸取每个样本时，必须使用不同的吸管，以防止交叉污染及错误结果

14. 每个检测卡只可使用一次

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氟喹诺酮类药物耐药志贺氏菌属在人类健康备受细菌耐药性问题威胁的背景下，国家兽医微生物耐药性风险评估实验室刘雅红团队在持续的耐药性监测过程中，从动物身上分离出对碳青霉烯和粘菌素同时耐药的大肠杆菌，并在该菌株中发现两个耐药基因，进而提出了杂合质粒形成模型，为后续研究提供了范本。文章于2016年10月24日发表于《自然-微生物学》（Nature Microbiology）。碳青霉烯类抗生素是人医临床治疗多重耐药革兰氏阴性菌感染zui重要的抗菌药之一，一旦碳青霉烯类药物失效，粘菌素可作为有力补充，用作治疗多重耐药阴性菌感染的zui后一道防线。但是，近几年来，随着这两类药物在临床上的广泛使用，细菌再一次突破了这两道防线。
碳青霉烯酶NDM-1zui早于2009年在印度新德里被发现，由于产NDM的细菌能够抵抗所有的β-内酰胺类抗生素，所以也得名“超级细菌”。粘菌素耐药基因MCR-1是2015年底在中国境内的动物和人医临床的菌株中发现，它能介导粘菌素低水平的耐药，自从被发现以来，短短几个月内，mcr-1已经在五大洲30多个国家检出。
在这篇文章中，研究人员在持续的耐药性监测过程中，从一只患细菌的宠物猫中分离一株对碳青霉烯和粘菌素同时耐药的大肠杆菌，进一步的分子生物学研究发现，这株大肠杆菌同时携带blaNDM-5和mcr-1两个基因，值得注意的是，两个耐药基因位于同一个可接合转移的杂合质粒中。
1.    之后刘雅红教授团队通过进一步的生物信息学挖掘，发现这个杂合质粒是由两个分别携带blaNDM-5和mcr-1的IncX3和IncX4质粒，在IS26和nic两个重组位点分别经过两次重组杂合而成。研究组进而提出了一个杂合质粒形成的模型，这为后续进一步研究相似的杂合质粒提供了可行的范本。样品收集和DNA提取
分别以来自法国（110头）、丹麦（100头）和中国（87头）共11个农庄，不同年龄、不同品种（17种）、不同饮食习惯的猪作为研究对象，取直肠的新鲜粪便，立即转入液氮或干冰冷冻，-80℃保存。取200mg粪便用于DNA提取。

Fluoroquinolone-resistant Shigella In the context of the high prevalence of bacterial resistance to human health issues, the Liu Yahong team from the National Veterinary Microbiological Risk Assessment Laboratory conducted an ongoing surveillance of drug resistance from animals Escherichia coli isolated from carbapenem and colistin were isolated from the body and two resistance genes were found in the strain. Then, a hybrid plasmid formation model was proposed, which provided a model for further research. Article published in Nature Microbiology on October 24, 2016. Carbapenem antibiotics is one of the most important antibacterials for clinical treatment of multi-drug-resistant gram-negative bacteria in human medicine. Once carbapenems fail, colistin can be used as a powerful supplement to treat multiple resistant The last line of defense of drug-negative bacteria. However, in recent years, bacteria have once again broken through these two lines of defense as the two types of drugs are widely used clinically.
Carbapenemase NDM-1 was first discovered in New Delhi, India, in 2009 and is also called "superbugs" because NDM-producing bacteria are resistant to all β-lactam antibiotics. The colistin resistance gene MCR-1 was found in clinical animal and human clinical isolates in China by the end of 2015. It mediates low levels of resistance to colistin. Since its discovery, MCR-1 has been discovered in just a few months , Mcr-1 has been detected in more than 30 countries on five continents.
In this article, the researchers isolated E. coli from a pet cat that is resistant to carbapenem and colistin, and further molecular biology during ongoing drug resistance surveillance Studies have found that this strain of Escherichia coli carrying both blaNDM-5 and mcr-1 genes, it is noteworthy that the two drug-resistant genes located in the same hybrid plasmid can be joined.
1. Afterwards, Professor Liu Yahong's team further digs through bioinformatics and finds that the hybrid plasmid is composed of two IncX3 and IncX4 plasmids carrying blaNDM-5 and mcr-1, respectively, and passes through two recombination sites of IS26 and nic respectively through two Sub-recombinant heterozygous. The team then proposed a model for the formation of hybrid plasmids, which provided a viable model for further research on similar hybrid plasmids. Sample collection and DNA extraction
A total of 11 farms from France (110 heads), Denmark (100 heads) and China (87 heads), pigs of different ages, varieties (17 kinds) and different eating habits were selected as study objects, Immediay transferred to liquid nitrogen or dry ice frozen, -80 ℃ preservation. Take 200mg of faeces for DNA extraction.