降钙素原抗体诊断试剂盒

通用名称：人降钙素原（PCT）酶联免疫分析试剂盒

英文名称：PCT Quantitative Enzyme-linked Immunosorbent Assay Kit

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【包装规格】 96人份/盒

【预期用途】

本试剂盒采用ELISA双抗体酶联免疫夹心法定量检测人血清、血浆及相关液体样本中降钙素原（PCT）含量。适用于严重感染或脓毒血症的早期诊断；全身性感染与非细菌性炎症反应（如自身免疫性疾病）的鉴别诊断；全身性细菌性感染与病毒感染的鉴别诊断；全身性细菌/真菌感染与器官移植排斥和移植后病毒感染的鉴别诊断；作为高危患者（如ICU、器官移植术后或接受免疫抑制治疗的患者）感染性疾病的监测指标。

【临床意义】
     人降钙素原（PCT）是人降钙素的前体物，无激素活性，其在健康人血清中水平极低，但在全身性细菌感染患者血清中含量迅速升高，感染后两个小时即可检测到，且持续时间长，其在血清中的水平与感染性疾病的严重程度呈正相关,经有效抗生素治疗后，PCT水平可迅速下降，而病毒感染、肿瘤、自身免疫性疾病、外伤（多创伤或手术创伤）、临床用药、慢性炎症以及局部感染者，PCT水平维持在正常范围内或者有轻度升高。因此，PCT是细菌感染所致重症全身性炎症反应的良好指标，在全身性细菌感染和脓毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察等方面有很高的临床价值。

在局限性感染、病毒感染、自身免疫性疾病、手术创伤和慢性炎症时，其血浆浓度正常或轻度升高；严重细菌感染或霉菌、寄生虫感染（如腹膜炎、软组织感染、蜂窝组织炎、吻合口漏、肺炎、ARDS）时大量上升，特别是脓毒性休克时PCT时浓度成倍升高。因此，利用它能有效地评估感染和炎症的严重程度及进展情况，还能监测药物疗效，指导外科围手术期的处理以及抗生素正确应用。

作为高危患者（如ICU、器官移植术后或接受免疫抑制治疗的患者）感染性疾病的监测指标；早期预测脓毒性休克、多器官功能不全综合征（MODS）、成人呼吸窘迫综合征（ARDS）及多器官功能障碍（MOF）的发生及判断疾病预后等。

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体夹心法测定标本中人降钙素原（PCT）水平。用纯化的人降钙素原（PCT）抗体包被反应板，加入待测标本孵育后，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的PCT抗体。如果标本中含有PCT，则能与包被在反应板上的PCT抗体结合，并与HRP标记的PCT抗体形成复合物，经洗涤后加入TMB底物，TMB在HRP酶的催化下产生蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。酶标仪在450nm波长下测定的吸光度（OD值）与标本中PCT含量呈线性关系。通过绘制标准曲线可以计算出标本中PCT的含量。

【主要组成成份】

注：使用时，先将瓶中内容物摇匀，不同批号试剂盒组份请勿混用

【储存条件及有效期】

1、   储存条件：2～8℃避光保存。

2、   有效期：2～8℃避光保存，自半成品检定合格之日起，有效期6个月。

【适用仪器】

酶联检测系统：

【样本要求】

1、   本试剂盒适用于定量检测人血清、血浆及相关液体样本中降钙素原（PCT）含量。

2、 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃次日后于1000 g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3、 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于1000 g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

4、 其它生物标本：1000 g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

5、   样本使用前应置于室温（18～30℃）平衡30分钟。

6、   样本稀释时应充分混匀，尽量避免起泡，可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。

7、   样本采集和处理时应戴口罩和手套，避免汗液、唾液及其气溶胶污染样本。

8、   样本检测前如需运输，建议运输时保持2-8℃（冰盒）或-20℃（干冰），不要超过上述保存期限。

9、   不能检测含NaN₃的样品，因NaN₃抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性

【检验方法】

1、试剂、样本准备

⑴  试剂准备

①      将试剂盒置室温（18～26℃）平衡15～30分钟。

②      从试剂盒中取出浓缩洗涤液，用新鲜的纯化水1：1稀释后加入洗板机的洗液瓶中。

⑵  样本准备

标准品的稀释：用标准品稀释液按照下图表将标准品稀释，制备1-5号标准样品。为保证结果的准确性，每次实验请配置新的标准品溶液。

2、试验条件

在室温（18～26℃）严格按照试剂盒说明书进行操作。

3、操作步骤

（1）    取出所需的PCT抗体包被板反应条置于微孔架上（立即将剩余的微孔反应条放回铝箔袋中，并重新密封铝箔袋）。

（2）    分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50 μL，待测样品孔中先加样品稀释液40 μL，然后再加待测样品10 μL（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，置37℃恒温箱孵育30分钟。

（3）    小心揭掉封板膜，弃去孔内液体，洗涤液注满各孔、静置30秒，甩干，重复5次，拍干。或者利用洗板机洗涤：程序4个循环，每孔350 μL，洗涤后拍干。

（4）    加入酶结合物，每孔加入酶标试剂50 μL，空白孔除外，充分混匀，置37℃恒温箱孵育30分钟。

（5）    重复操作程序③

（6） 加入显色剂A50 μL，再加入显色剂B50 μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

（7）    每孔加终止液每孔50 μL，充分混匀，终止反应。

（8） 以空白孔调0，用酶标仪依序测量各孔在450 nm波长的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

4、试验结果的计算

可以采用作图法或计算法进行结果计算，推荐采用计算法。

作图法：以标准品抗原含量为横坐标（x），以其对应的吸光值（OD值）为纵坐标（y）绘出标准曲线，然后根据检测样本测得的吸光度（OD值）在标准曲线上查出相应的样本抗原含量，再乘以样本稀释倍数，即为样本的实际浓度。

计算法：以标准品抗原含量为自变量（x），以其对应的吸光值（OD值）为应变量（y），求出回归方程，将待测样本的吸光值代入回归方程，求得对应的标本抗原含量，再乘以样本稀释倍数，即为样本的实际浓度。

【检测范围】

75ng/L -1200ng/L

【参考值（参考范围）】

健康人：<500 ng/L

【检验结果的解释】

对PCT阳性检出者，应结合病史、临床症状及体征等综合判断。以PCT含量<500 ng/L的为阴性，对PCT含量在100~500 ng/L之间者，建议动态观察。对PCT含量大于1200 ng/L的样本，应准确稀释后重做，zui后将测得的PCT含量乘稀释倍数即为该样本实际PCT含量。

【检验方法的局限性】

PCT的水平作为诊断、监测重症感染患者的常规指标，不能作为是否存在细菌和病毒感染的*依据。对PCT检测结果的解释需结合其他临床检查结果和根据临床疾病诊断的程序。

需要注意的是：

（1）       在病毒感染或非感染性炎症反应时，血PCT水平不升高或仅有轻度升高。

（2）       PCT水平测定不能特异性反映病原体类型及其对抗生素的敏感性和耐药性；必须同时结合病原学检查和药物敏感试验结果以提高治疗的针对性。

（3）       接受OKT3免疫抑制治疗的移植患者PCT水平常有提高，这可能是细胞因子释放综合征的继发表现，应用OKT3后PCT水平的升高并不一定提示感染的存在，须结合其他指标综合分析。

（4）         脓毒血症患者不论是否接受免疫抑制治疗，其在发生脓毒症的zui初3天内PCT水平并无差异，随后免疫缺陷患者在第3～5天时PCT 值有所减低，而免疫力正常的患者至第5天后PCT水平才开始下降,对于脓毒血症患者建议采取动态观察。

【产品性能指标】

1.       特异性：

20份正常人血清PCT 检测结果不得出现一份大于500 ng/L。

2.       zui低检出量：zui低检出量为40 ng/L。

3.       线性范围：75ng/L～1200ng/L，相关系数r应不低于0.98。

4.       稳定性：37℃放置3天，检定结果应达到标准。

【注意事项】

1． 试剂盒使用前应置于室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2． 使用时，先将瓶中内容物摇匀，不同批号试剂盒组份请勿混用。

3． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

4． 严格控制反应时间和显色时间，一次加样时间控制在5分钟内。

5． 本试剂盒为一次性用品，使用后的试剂盒和样本等废弃物应作为传染源按照国家相关规定处理。

6． 底物请避光保存。

7． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准，无效结果必须重测。

9． 本试剂盒采用硫酸作为终止液，其具有轻微的腐蚀性，使用时应避免接触衣物或眼、手等皮肤暴露部位。

【生产企业】 广州健仑生物科技有限公司
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