重组抗原（rK39）试纸条诊断黑热病

预期使用

    该检测条用于诊断内脏利什曼病，利用快速的免疫层析法在人血清中定性检测杜氏利什曼原虫（L. donovani）抗体。该实验有助于诊断内脏利什曼病（VL）。并只用于体外诊断。

实验原理

  该检测条的硝化纤维膜在实验区包被了rK39，在质控区包被了鸡抗蛋白A。在实验中，血清样本与胶体金共轭物（胶体金标记的蛋白A）反应，而胶体金共轭物预先包被在检测条上。混合物在毛细管作用下沿着硝化纤维膜移动，然后与重组的VL抗原反应，并生成一条红色带。如果存在该红色带表明阳性结果，反之则为阴性结果。混合物继续移动，到达固化的鸡抗蛋白A区（质控区），会在质控区生成一条红色带。质控区红色带的出现说明样本体积充足、液体流动适宜和作为对试剂的质控。

保存方法

    该密封袋或者瓶中含实验检测条应保存在20—28℃（室温）直至有效期。瓶中含捕获缓冲液也应保存在20—28℃。暴露在超过30℃温度下会影响实验性能，所以应尽量避免。检测条不应冰冻保存。从密封袋中取出后应在1小时内使用，避免受湿度影响。

血清的采集

1该实验中应使用人血清。全血样本不应采用，因为过度的背景可能会影响正确读取实验带。应使用缓冲液稀释血清，避免直接开始实验。阳性血清应使用阴性血清进行稀释。

2 经凝血后离心分离血清，尽量避免溶血。

3 应在采集血清后尽快开展实验。血清不能长时间存放在室温下。血清于2-8℃可保存3天。否则血清应保存在20℃以下。

4 实验前血清平衡至室温。冰冻的血清必须充分融解。血清避免反复冻融。

5 如果血清需要运输，其包装应该符合联邦的传染源运输法规。

试剂盒成分

该黑热病快速检测条的硝化纤维膜在实验区包被了重组的rK39，在质控区包被了鸡抗蛋白A。试剂盒的成分如下：

1、25份的独立包装检测条或者25份检测条于一个含干燥剂瓶子中。

2、1瓶的捕获缓冲液

实验步骤

1 实验前让血清平衡至室温。

2 从密封袋或瓶中取出黑热病快速检测条

3 在检测条箭头下方加入20 ul的血清。

4 将检测条置于实验管中，或者96孔的组织培养板的微孔中，根据检测条上的箭头，其末端应该朝下。

5 加入2-3滴（150ul）的捕获缓冲液

6 在10分钟内读取结果。在读取结果前，背景的清晰是十分重要的。尤其是当样本为低滴度的抗利什曼原虫抗体时，就只有一条很弱的色带出现在实验区（T）。10分钟后读取可能会导致错误结果。

注意：不要只是加入捕获缓冲液进行实验。必须首先加入20ul的血清。

      如果在加入捕获缓冲液后的10-15秒并没有观察到胶体金的移动，可轻轻压检测条上的样本加入区，直到观察到胶体金的移动。

结果解释

阳性结果

实验阳性则质控带和实验带均出现，如图1。阳性结果表明检测到杜氏利什曼原虫抗体。一条微弱的色带也为阳性结果。作为解释指南，实验区的红色带的颜色强度与抗利什曼原虫抗体浓度相关。实验带为“弱阳性"血清样本，实验结果可能为弱阳性红色带与红点之间，几乎为白色背景（“弱阳性"样本则含有对重组抗原低亲和力或者低滴度抗体）。

阴性结果

实验为阴性，则只有质控带出现。一个阴性结果表明无检测到杜氏利什曼原虫抗体。没有出现实验带，如图2。

无效结果

则无出现质控带也没有出现实验带。如果没有出现质控带该实验也无效，即使出现了实验带。建议使用新的检测条和新血清再次进行实验。

注意：实验区的红色带的变化是依赖于抗利什曼原虫抗体浓度。然而，该实验不能检测抗体的定量值和增加的百分比。

预期值：

在流行的地区，该黑热病快速检测条灵敏度为90%或更高。而特异性可能因不能地区而不同。例如在印度104名健康人中超过13名为阳性反应。

本译文由广州健仑生物科技有限公司编译，仅供参考，请以原说明书为准或与我们公司工作人员！

【公司名称】 广州健仑生物科技有限公司
【】   
【】
【电子邮件】 Service@jianlun.com  Jim@jianlun.com
【腾讯 】  712628581
【公司】 www.jianlun。。ｃｏｍ 
【营销中心】 广州市中山大道东81号金碧世纪商务综合楼254室
【公司地址】 广州市天河区车陂第十五工业园一幢4067室