西尼罗河检测试剂经CDC提供的试剂检验与验证。本试验使用了一种称为WNRA的重组抗原,它可以作为西尼罗病毒感染的快速血清学指标,WNRA蛋白是一种重组抗原,它是由含有西尼罗病毒两个抗原的序列多肽构成。
该试剂盒是基于两步夹心法原理。在该测定中,将微量滴定孔与标准品,质控或未知血清样品孵育。可以将血清样品与孔中添加的样品稀释缓冲液直接混合(另请参见以下说明)。洗涤后,将孔用对人IgG特异的抗体处理,并用辣根过氧化物酶(HRP)标记。在第二温育和洗涤步骤之后,将孔与四甲基联苯胺(TMB)底物温育。
然后加入酸性终止溶液,并通过在450纳米处的吸光度测量来确定底物的酶促转化程度。高于某个阈值时,WNRA和质控孔的吸光度之比可以准确确定是否存在针对WNV的抗体。提供一组阳性和阴性样品作为内部质控,以监测试剂盒的完整性。
【西尼罗病毒试剂盒】
1. 微孔板:96孔即用型,每孔均包被结合西尼罗重组抗原的单抗。
2. IgG样品稀释液:1×25ml,即用 2-8℃下保存至效期。
3. IgG阴性质控: 1×30ul,2-8℃下保存至效期。要长时间储存,将其分装于小瓶里,在-70℃下储存。
4. IgG阳性质控: 1×30ul,2-8℃下保存至效期。要长时间储存,将其分装于小瓶里,在-70℃下储存。
5. 洗涤液(10X): 1×120ml,2-8℃下保存至效期。
6. EnWash: 1×20ml, 2-8℃下保存至效期。
7. 酶联物: 1×6ml,即用型,2-8℃下保存至效期。
8. TMB底物液: 1×9ml,即用型,2-8℃下保存至效期。
9. 终止液: 1×6ml,即用型,2-8℃下保存至效期。