喹诺酮类检测试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物喹诺酮类药物和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗喹诺酮类药物抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留喹诺酮类药物的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应残留物喹诺酮类药物的含量。
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上,洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。实验开始前需:将20×浓缩洗涤液用去离子水按1:19稀释成工作洗涤液。
1、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
2、加样反应:加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应45分钟。
3、洗涤:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
4、显色:每孔加入底物液A50µl,再加底物液B50µl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟。
5、终止:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应。
6、测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应终止反应后在10分钟内完成。