　　利什曼原虫试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人利什曼原虫抗体水平。用纯化的人利什曼原虫抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入利什曼原虫抗体，再与HRP标记的利什曼原虫抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。

　　1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

　　2．根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。

　　3．加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

　　4．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　5．每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

　　6．甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　7．每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

　　8．取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

　　9．在450nm波长处测定各孔的OD值。

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